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倒置顯微鏡、相差顯微鏡和熒光顯微鏡我們該如何正確選擇呢

作者:admin 瀏覽量:299 來源:本站 時間:2023-03-28 10:20:35

信息摘要:

顯微鏡是細胞培養及相關衍生實驗中非常重要的儀器。目前,市場上有各種類型的顯微鏡。對于剛剛入行的小白來說,選擇一個符合需求、適用的是一個挑戰。這里我們將介紹倒置顯微鏡、相差顯微鏡、熒光顯微鏡的原理供您選擇。

顯微鏡是細胞培養及相關衍生實驗中非常重要的儀器。目前,市場上有各種類型的顯微鏡。對于剛剛入行的小白來說,選擇一個符合需求、適用的是一個挑戰。這里我們將介紹倒置顯微鏡、相差顯微鏡、熒光顯微鏡的原理供您選擇。  

1.倒置顯微鏡

與普通顯微鏡相比,倒置顯微鏡的物鏡和照明聚光系統以載物臺為軸顛倒,物鏡在載物臺下方,照明系統在載物臺上方。采用這種結構,可以顯著擴大照明聚光系統與載物臺之間的有效距離,便于放置較厚的待觀察器具,如培養皿、細胞培養瓶等。

由于倒置顯微鏡觀察的材料一般是培養的細胞,透明度高,結構反差不明顯,倒置顯微鏡往往配有相差物鏡,實際上構成了倒置相差顯微鏡。

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2.相差顯微鏡

在相差顯微鏡檢查時,只有當透射光的波長(顏色)和振幅(亮度)隨周圍介質發生明顯變化時,才能用肉眼分辨出視場中的樣品。當照明光通過無色透明的物體時,透射光的波長和振幅沒有明顯變化,尤其是振幅幾乎不變。因此,當用普通的光學顯微鏡觀察時,很難分辨這種物體的結構。需要通過固色、染色等物理化學方法,使樣品的透射光與背景在波長或振幅上發生變化,即在顏色和亮度上存在差異,從而進行鑒別。

相差顯微鏡不同于普通的光學顯微鏡,裝置中有四個必不可少的部件:相差顯微鏡(內部有相位板)、帶環形光闌的轉盤聚光鏡、軸對準望遠鏡和綠色濾光片。關鍵是相位差物鏡和環形光闌,更具體地說是相位板和環形光闌。光源產生的光通過環形光闌和聚光器形成環形光錐,照射待檢物體,產生直射光和衍射光。兩者分別經過相位板上的共軛面和補償面,產生干涉。共軛面和補償面上的鍍膜可以使直射光和衍射光的相位分別滯后1/4.導致干涉光的振幅加強和減弱,從而產生亮反差和暗反差。從而即使被檢測的物體沒有被染色也可以被清楚地區分。

3.熒光顯微鏡

熒光顯微鏡用于研究細胞內物質的吸收和運輸,化學物質的分布和定位等。熒光顯微鏡采用發光效率高的點光源,通過濾色系統發出一定波長的光(紫外光365nm或紫外藍光420nm)作為激發光,激發標本中的熒光物質發出各種顏色的熒光,再通過物鏡和目鏡的放大觀察。在這樣強烈對比的背景下,即使熒光微弱,也容易識別,靈敏度高。主要用于細胞結構、功能和化學成分的研究。


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